Description du sujet de thèse

Rôle de la cycline B3 non canonique dans la méiose et la mitose chez Phallusia et Clytia

Contexte de travail

Le projet sera mené sous la direction de Stefania Castagnetti (equipe Mitose et control du fuseaux), en co-direction avec Evelyn Houliston (equipe mécanismes développementaux des cnidaires). Les deux équipes sont basées au Laboratoire de Biologie du development de Villefranhce (LBDV) et s'intéressent depuis longtemps à la régulation du cycle cellulaire, à la biologie des ovocytes et à l'embryogenèse précoce chez les ascidies (équipe Castagnetti) et les cnidaires (équipe Houliston). Les deux equipes ont l'expertise et le savoir-faire nécessaires à la réalisation du projet. Des équipements de pointe pour la biochimie, la biologie moléculaire et la microscopie, ainsi que des installations pour animaux sont disponibles sur place.
Activités confiées :
Les cycles de division cellulaire eucaryote sont régulés par phosphorylation, les protéines cellulaires responsables de la progression de la phase M étant universellement phosphorylées par le complexe Cdk1-Cyclin B. Ce projet examine comment le mécanisme du cycle cellulaire s'est adapté pour réguler les divisions méiotiques dans le contexte particulier de la méiose animale féminine. Il se concentre sur le rôle de la Cyclin B3, récemment identifiée comme un régulateur essentiel de la méiose des ovocytes chez les vertébrés. Chez la souris et le xénope, la dégradation de la cycline B3 après la méiose I (MI) empêche la progression vers la deuxième méiose, ce qui conduit les ovocytes à s'arrêter en MII pour attendre l'entrée du spermatozoïde. Bien que la cycline B3 soit hautement conservée chez les animaux, ce rôle dans l'arrêt méiotique en MII est spécifique aux vertébrés, car les ovocytes des espèces non vertébrées s'arrêtent à d'autres stades de la méiose. L'objectif du projet de doctorat est de comprendre le rôle de la cycline B3 pendant la méiose et les premières divisions embryonnaires chez l'ascidie Phallusia mammillata et la méduse Clytia hemisphaerica. L'étudiant déterminera les profils d'expression protéique des cyclines B1/2 et B3 canoniques pendant la méiose et la mitose à l'aide d'anticorps personnalisés. Afin de distinguer les contributions de la synthèse et de la dégradation protéiques aux profils identifiés des deux protéines cyclines B, la dynamique de dégradation sera analysée in vivo à l'aide d'une imagerie quantitative après injection d'ARNm codant pour la cycline B3 marquée par fluorescence et d'inhibiteurs spécifiques de la dégradation et/ou de la traduction. L'étudiant analysera également la fonction de la cycline B3 dans la méiose et la mitose en manipulant les niveaux de protéines, soit en les réduisant à l'aide de morpholinos ou d'ARNsh spécifiques, soit en les surexprimant par injection d'ARNm transcrits in vitro spécifiques. Enfin, les cibles spécifiques de CDK/cycline B3 seront identifiées à l'aide d'une approche phosphoprotéomique.