Description du sujet de thèse

Ce projet de doctorat vise à caractériser les mécanismes structuraux d'une protéine kinase réceptrice humaine qui est impliquée dans de nombreuses maladies, telles que des cancers. Le(a) candidat(e) sera impliqué(e) dans l'expression de protéines en bactéries et cellules eucaryotes (cellules d'insectes et cellules humaines), la purification de protéine, la détermination de structure atomique par cryo-EM ou cristallographie aux rayons X et la caractérisation fonctionnelle de protéines par des approches biochimiques et biophysiques.

Dans notre équipe, nous nous intéressons à une protéine kinase réceptrice particulière qui est impliquée dans la régulation de la croissance des cellules. Sa dérégulation conduit à des maladies humaines telles que des cancers affectant des millions de personnes dans le monde. Par conséquent, ce récepteur est une cible thérapeutique très prometteuse. Cependant, le développement de nouvelles solutions thérapeutiques ciblant ce récepteur est limité par notre manque actuel de compréhension de son mécanisme moléculaire, qui est principalement dû à l'absence de structure pour ce récepteur. Le but de l’étudiant(e) sera de résoudre la structure du récepteur entier ou de ses domaines isolés pour faire la lumière sur ses mécanismes moléculaires.

Dans ce but, l'étudiant(e) sera impliqué(e) dans l'optimisation d'un système original d'expression de protéines recombinantes dans des cellules eucaryotes. Différentes stratégies de purification de protéines seront testées avec plusieurs étiquettes d'affinité, de l’optimisation des délimitations des constructions protéiques et tester plusieurs orthologues. L'étudiant purifiera des protéines solubles et des protéines membranaires. La solubilisation des protéines membranaires sera effectuée avec des détergents ou des systèmes membranaires (nanodisques, amphipol). Les conditions de cristallisation et de cryo-congélation seront optimisés afin d'obtenir des structures atomique par cristallographie aux rayons X ou cryo-EM. La structure obtenue sera validée par des tests fonctionnels in vitro (enzymologie, ITC, SPR, TR-FRET, polarisation de fluorescence) et en cellules (test d'activité, tests de liaison et tests de prolifération cellulaire).

En conclusions, le candidat sera formé pour acquérir une large expertise en biologie structurale intégrative, biochimie, biophysique et biologie cellulaire.

Contexte de travail

Ce projet sera réalisé en collaboration avec des laboratoires académiques nationaux et internationaux dont l'objectif est l'étude des mécanismes moléculaires des récepteurs membranaires. De nouvelles collaborations pourront se mettre en place au cours de l'avancement du projet.

Le poste se situe dans un secteur relevant de la protection du potentiel scientifique et technique (PPST), et nécessite donc, conformément à la réglementation, que votre arrivée soit autorisée par l'autorité compétente du MESR.