Missions

L’ingénieur purifiera des isoformes d’un complexe de protéines issu de différentes origines et analysera les propriétés de l’assemblage.
L’ingénieur devra utiliser en particulier des gènes modifiés qu’il aura lui-même créé. Préalablement à la caractérisation des complexes, l’ingénieur préparera leur analyse en spectrométrie de masse sur les instruments disponibles au sein de la plateforme de l’institut (SiCAPS).

Activités

- Évaluer comment des modifications d’une protéine peuvent influencer l'activité.
- Former et encadrer en interne les étudiants (doctorant, étudiants en M2, M1, L3) pour transmettre sa compétence.
- Présenter ses résultats en interne et en externe en anglais.
- Assurer la maintenance d’équipements spécifiques du laboratoire nécessaires à la réalisation du projet (robot d’analyse, systèmes de chromatographie liquide…).

Compétences

- Expertise en biochimie des protéines surexprimées ou non (fractionnement, chromatographie à haute ou moyenne pression),
- L’ingénieur sera autonome en enzymologie et interprétera les données permettant de calculer les constantes cinétiques associées à différentes isoformes,
- L’ingénieur devra posséder une grande expérience en biologie moléculaire et une autonomie pour le clonage et l’expression de protéines,
- Bonne maîtrise des techniques d’analyse par spectrométrie de masse de type electrospray et MALDI (utilisation de logiciels dédiés),
- L’ingénieur sera familier avec les approches de biologie de synthèse,
- L’ingénieur devra assurer la mise en forme des données en vue de leur valorisation pour présentations écrites ou orales,
- Maîtrise de l’anglais écrit et parlé (niveau B2/C1).

Contexte de travail

L'I2BC est une très grande unité mixte de recherche CNRS, CEA et Université Paris Saclay composée de près de 600 personnes. L'unité est constituée d’une soixantaine d’équipes de recherche réparties dans 5 départements scientifiques (Biologie des Génomes, Biologie Cellulaire, Virologie, Microbiologie, Biochimie/Biophysique/Biologie Structurale). Leur activité est soutenue par 16 plateformes technologiques de haut niveau et des services support et soutien mutualisés.
L'activité s'exercera au sein de l'équipe Promti "Maturation des protéines, destinée cellulaire et thérapeutique" du département de Biologie des Génomes"

L’équipe Promti s’intéresse à un ensemble de modifications affectant les protéines. Ces modifications ont en commun d’affecter les extrémités amines réactives qui sont positionnées soit au N-terminus soit sur les chaines latérales des lysines. Ces modifications sont catalysées par des familles distinctes de protéines permettant des modifications différentes, mais il s’avère de plus en plus clair que certaines enzymes peuvent cibler plusieurs types de cibles protéiques ou catalyser des modifications différentes. Les modifications peuvent affecter seulement une partie des extrémités et ces altérations peuvent varier au cours de la vie cellulaire.
L’équipe cherche à comprendre la nature et l’effet biologique de ces modifications, en particulier au niveau de la partition cellulaire dans des sous-compartiments définis ou non par des membranes. Les aspects concernant également l’impact de ces modifications sur la maintenance d’un protéome fonctionnel sont pris en considération. Les populations de protéines concernées, les compétitions entre différentes modifications sur le même groupement chimique et l’ajustement physiologique de leur stœchiométrie sont au cœur du domaine relevant de la protéostasie.
L’analyse des protéines et de ses modifications s’effectue par spectrométrie de masse sur des instruments gérés par la plateforme attenante à la localisation de l’équipe. Les propriétés des catalyseurs permettant les modifications sont également caractérisées in vitro par des approches biochimiques et in vivo par des approches génétique (effets de la perte de fonction). La nature des modifications peut aussi être analysée dans des extraits cellulaires issus de différentes espèces par des approches centrées sur les groupes amines concernés ou par des approches plus globales. Dans tous les cas les aspects quantitatifs sont recherchés et analysés. Des outils informatiques d’analyse et des bases de données sont produites. Des analyses biophysiques in vitro ou de biologie cellulaire in cellulo peuvent servir à compléter la meilleure compréhension des distributions des protéines modifiées entre différents compartiments.