Missions

Le chercheur ou la chercheuse postdoctoral qui rejoindra notre équipe sera chargé de concevoir et de mettre en œuvre des expériences de fluorescence (ensemble et molécule unique smFRET) pour mesurer les changements conformationnels se produisant lors de la libération de TBP

Activités

Les expériences comprennent des mesures d'anisotropie de fluorescence pour quantifier la liaison de l'ADN du promoteur au complexe TBP-SAGA et la dissociation de SAGA. La corrélation avec la courbure de l'ADN sera mesurée par smFRET sur de l'ADN doublement marqué dans des complexes SAGA-TBP. Les changements de conformation au sein du complexe seront également suivis en mesurant les changements de distance entre les acides aminés non naturels introduits aux positions clés identifiées sur nos structures CryoEM. Les mesures de smFRET rendront compte des changements conformationnels se produisant dans le complexe avant et pendant la libération de TBP après l'ajout de TFIIA et d'ADN.

Compétences

Nous recherchons des candidats ou des candidates motivés et ambitieux, satisfaisant aux conditions suivantes :
o Un doctorat récemment obtenu en biochimie ou en biophysique.
o Un intérêt pour le développement de protocoles et de techniques non conventionnels.
o Une expérience scientifique pertinente appuyée par des publications
o D'excellentes compétences en communication en anglais et en travail d'équipe.

Nous demandons une expérience en spectroscopie de fluorescence ou en microscopie avancée, en ingénierie des protéines et/ou en biochimie. Les compétences en informatique (programmation Labview, Python, …) seront considérées positivement.

Contexte de travail

TATA-box Binding Protein (TBP) est universellement requise pour la synthèse de molécules d'ARN chez les eucaryotes. Pour les gènes dépendants de l'ARN polymérase II (Pol II), l'interaction de TBP avec le promoteur initie l'assemblage d'un complexe de pré-initiation de la transcription (PIC) qui place l'enzyme sur le site de démarrage de la transcription (TSS). Les complexes multi-protéiques TFIID et SAGA partagent la capacité de charger TBP sur les promoteurs du gène Pol II et de permettre la transcription. Cependant, la façon dont SAGA et TFIID positionnent TBP sur les promoteurs, la cinétique des interactions TBP-ADN et les modes de liaison de TBP ne sont pas bien compris, malgré l'importance de ces événements dans l'expression des gènes.

Ce projet combine l'expertise de 3 laboratoires en biologie moléculaire et biochimie, génétique des levures, mesures cinétiques et biologie structurale, pour comprendre le rôle de SAGA dans l'initiation de la transcription activée. La combinaison d'expériences de reconstitution in vitro, de cryomicroscopie électronique sur particules uniques (cryo-EM) et de mesures de FRET permettra d'identifier les intermédiaires fonctionnels clés et de comprendre leurs relations dynamiques.

Le CBS (http://www.cbs.cnrs.fr) est un institut dédié à la recherche de pointe en biologie structurale et biophysique, doté d'équipements de haut niveau. Montpellier est une ville attractive et dynamique sur la côte méditerranéenne avec une importante communauté internationale. Notre équipe de recherche comprend 18 personnes dont 8 chercheurs permanents. L'équipe a une longue expérience dans la formation et l'encadrement de jeunes chercheurs et chercheuses.
Pour info : https://integrativebiophysicsofmembranes.wordpress.com

Contraintes et risques

La candidature doit être soumise en anglais et doit comprendre :

o Un Curriculum vitae avec une liste of publications,
o Une description (1/2 à 1 page) des recherches précédentes
o Le nom, adresse et contact de 2 personnes référentes